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Coluna HPLC Aquosa, fase estacionária hidrofóbica e fase móvel aquosa

Coluna HPLC Aquosa, fase estacionária hidrofóbica e fase móvel aquosa

A Coluna HPLC Aquosa Kromasil é a inovação mais recente do Nouryon, uma fase de HPLC que foi projetada especificamente para compostos polares.

Esta Coluna Cromatográfica da Kromasil 100 Å C18 (w) permite o carregamento e o início da operação em 100% aquoso, permitindo novas oportunidades para engenheiros e cientistas que trabalham com HPLC.

Um octadecilsilano (C18) é provavelmente a modificação de superfície mais comumente usada em HPLC. É mais estável e altamente hidrofóbico. O impacto da interação hidrofóbica com a fase estacionária pode ser perfeitamente ajustado pela composição orgânica da fase móvel na cromatografia de fase reversa. Em muitos casos de separação, esta é uma maneira muito eficiente de separar substâncias misturadas.

Coluna HPLC Aquosa, executando fase estacionária hidrofóbica e fase móvel aquosa

Muitas substâncias, como peptídeos e proteínas menores, têm estruturas terciárias avançadas mantidas por interações de ligação interna não covalentes relativamente fracas. Altas concentrações de solventes orgânicos, como pode acontecer em RP HPLC, podem interferir nessas interações e potencialmente prejudicar a atividade biológica da proteína. Muitas vezes, este é um processo reversível, mas uma etapa adicional para restaurar a estrutura pode ser necessária. Para evitar isso, pode ser interessante ser capaz de realizar a purificação em condições quase aquosas ou totalmente aquosas.

Recentemente, a Kromasil introduziu uma fase C18 molhável para purificação em escala de produção de substâncias polares como biomoléculas sob condições aquosas e aplicações analíticas de HPLC. Nominalmente, a fase molhável ainda é uma fase C18.

Em uma fase C18 regular, se condições 100% aquosas forem aplicadas gradualmente, a fase móvel pode manter um contato razoavelmente bom com a fase estacionária, desde que a alta pressão no sistema seja mantida. Nesta situação, a pressão obriga a fase móvel a estar presente nos poros da fase estacionária, apesar da força de repulsão da superfície hidrofóbica. Se a pressão cair (isto é, na diminuição ou parada do fluxo), o líquido é expulso dos poros, reduzindo drasticamente a superfície de interação entre as fases estacionária e móvel. Para as propriedades cromatográficas, isso significa uma perda severa na seletividade e coeluição dos componentes da amostra.

A disponibilidade da superfície pode ser restaurada na coluna, alternando de volta para as condições de fase normais, mas a execução cromatográfica real pode ser considerada arruinada.

Para tornar a fase estacionária molhável em condições totalmente aquosas (evitando o orvalho como acima), um componente polar é introduzido na superfície, como uma fase de modo misto. Alguns adicionaram os grupos polares na raiz do modificador de superfície. A fase molhável Kromasil tem como limite de extremidade embutido polar. Isso também permite uma melhor estabilidade química da fase sob condições ácidas em comparação com outras fases de purificação relacionadas no mercado.

Características da Coluna HPLC Aquosa

Comparação das propriedades de fase entre Kromasil molhável 100-5-C18 (w) e o clássico 100-5-C18 de acordo com o conjunto de testes Tanaka.

Resultados dos testes de Tanataka resumidos no diagrama de aranha

As principais diferenças entre o C18 (w) molhável e o C18 clássico mostram a capacidade de silanol e a capacidade de troca iônica em pH 7. Isso se deve principalmente ao capeamento de extremidade embutido polar de C18 (w).

Estabilidade química

O novo Kromasil C18 (w) sob condições difíceis e mais de 300 volumes de coluna claramente manterá sua retentividade com o tempo. Esse desempenho garante aos engenheiros e pesquisadores a usabilidade de longo prazo dessa fase molhada.

Retenção de 2 substâncias ao longo de 32 injeções entre os ciclos de teste
Para obter mais detalhes sobre as condições cromatográficas para a ilustração deste artigo, bem como aprender mais sobre esta fase: propriedades de acordo com o conjunto de teste Tanaka, exemplos e disponibilidade atual, visite a página da fase molhável no site Kromasil .