O Álcool Isopropílico Estéril (IPA) é utilizado em toda sala limpa para higienizar superfícies de trabalho, luvas e equipamentos. Entretanto, precisa-se saber que os frascos de spray IPA podem dispersar contaminantes biológicos. Devido a existência de esporos em um ambiente e o mecanismo de gatilho da garrafa pode puxar o ar contaminado e disseminar contaminantes por toda sala limpa.
Olhando para uma sala limpa, veremos várias formas de desinfetantes, o mais comum é o álcool Isopropílico a 70%, também chamado de isopropanol ou simplesmente IPA. Ele mata os organismos vegetativos ao quebrar as paredes celulares, sendo eficaz contra a flora comum da pele e alguns vírus como “herpes simplex e influenza”. O Álcool Isopropílico não é eficiente contra todos microrganismos, pois é ineficaz contra esporos de fungos e bactérias como o bacilo spp.
Álcool isopropílico Estéril (IPA) conforme requisitos de esterilidade da USP
O Guia de Boas Práticas de Fabricação da CE, revisão do Anexo 1 – Fabricação de Medicamentos Estéreis, afirma que, “Desinfetantes e detergentes devem ser monitorados para contaminação microbiana; as diluições devem ser mantidas em recipientes previamente limpos e devem ser armazenadas apenas por períodos definidos, a menos que sejam esterilizadas. Sanitizantes, desinfetantes e detergentes usados nas áreas de Graus A e B devem ser esterilizados antes do uso.” Isso significa que é necessário validar a esterilidade dos frascos IPA usados em salas limpas de biociências ISO Classe 5. Uma maneira de economizar tempo e dinheiro é comprar IPA estéril preparado com certificados de conformidade, análise e irradiação por lote fabricado para garantir que o produto que você está comprando atenda aos requisitos de esterilidade da USP.
Por quanto tempo uma garrafa de álcool pode permanecer em um ambiente controlado? Em que ponto ele se tornará ou poderá ser contaminado?
Os frascos de spray de gatilho funcionam expelindo IPA e, em seguida, aspirando o ar do ambiente para pressurizar novamente o frasco. Se houver esporos presentes no ar, é provável que o álcool esteja contaminado. “Para evitar a introdução de contaminação, os desinfetantes devem ser estéreis, devidamente manuseados em recipientes estéreis adequados e usados por não mais do que o período predefinido especificado por procedimentos escritos.” Empresas são obrigadas a validar a quantidade de vez que um frasco de desinfetante pode ser usado dentro do ambiente controlado. O uso pode variar desde o descarte após cada turno ou diário, semanal, mensal ou até que a garrafa acabe.
Órgãos reguladores gostam de ver que haja controle e validação. A maneira mais fácil seria descartar os frascos após cada turno, sem chance de contaminação cruzada e sem necessidade de validação adicional.
Teste com Álcool Isopropílico 70% Estéril TX3270 da Texwipe
O potencial de contaminação deve ser inversamente proporcional à limpeza do ambiente em que o produto é usado. Para determinar se o potencial de contaminação é significativo, frascos de isopropanol 70% estéril TX3270 foram operados em três ambientes de limpeza variada ao longo de um período de 30 dias.
Objetivo do teste
Para este estudo, quarenta e cinco frascos de Texwipe TX3270 estéril 70% isopropanol foram distribuídos em três ambientes de limpeza diferente. Quinze garrafas foram levadas para a Sala Limpa de Produção ISO Classe 5. Quinze garrafas foram mantidas em uma área controlada não classificada usada para Enchimento Industrial, “Área FlexLine”. Por último, quinze garrafas foram mantidas em um depósito não regulamentado.
Cada grupo de garrafas foi claramente identificado como “CR” para Sala Limpa, “FL” para Área FlexLine ”e“ WH ”para Armazém. Os sprays de gatilho foram pressionados duas vezes por dia útil por um período de 30 dias. Os bocais foram deixados abertos durante o estudo. Após quatorze dias, cinco dos frascos de cada área foram coletados e quatro foram enviados para teste de esterilidade da USP em um laboratório independente qualificado. As quatro garrafas foram combinadas para uma amostra composta. Após 21 dias, mais cinco frascos de cada grupo foram coletados e quatro testados. Ao final dos 30 dias, os cinco frascos restantes foram coletados e quatro enviados para teste final de esterilidade.
O método atual de teste de esterilidade USP <71> foi usado para testar o álcool. Cada um dos quatro frascos de teste foi composto e testado por filtração a vácuo através de um filtro de 0,45 μm. Três enxágues foram feitos com 100 mL de Fluido D da USP cada. O fluido D foi escolhido para neutralizar a natureza antimicrobiana do IPA. Após a filtração, metade dos filtros foi aplicada em FTM (Fluid Thioglycollate Medium) e a outra metade em SCDM (Soybean Casein Digest Medium). As amostras foram incubadas durante 14 dias, o FTM a 30 – 35 ° C e o SCDM a 20 – 25 ° C. Um teste de bacteriostose / fungistase (B / F) da USP foi realizado para garantir que o IPA não inibisse o crescimento, o que confirmou a validade dos testes de esterilidade
Texwipe TX3270
O produto selecionado para este ensaio foi o Álcool Isopropílico Estéril Texwipe TX3270 (70% isopropanol / 30% água USP), em um frasco spray de gatilho. Na produção, cada garrafa pré-limpa é preenchida com a solução de álcool isopropílico-água que é pré-filtrada por meio de um filtro de 0,2 μm. O frasco cheio é equipado com um pulverizador de gatilho e saco duplo. O saco duplo permite limpar com desinfetante o saco externo antes da introdução do saco interno nas áreas assépticas. As garrafas ensacadas são embaladas em caixas com 12 unidades. A caixa consiste em 12 unidades com saco duplo em um forro de caixa de proteção interna dentro de uma caixa de papelão ondulado. O produto embalado é então irradiado com gama a um nível de esterilidade de 10-6 de acordo com as diretrizes da AAMI.
Áreas de Teste
Três áreas da fábrica foram escolhidas para os locais de exposição. As garrafas do Grupo 1 foram colocadas em um ambiente de sala limpa ISO Classe 5 (Classe 100). Os frascos do Grupo 2 foram colocados na área FlexLine, aproximadamente um ambiente ISO Classe 7 (Classe 10.000). As garrafas do Grupo 3 foram colocadas na área do Armazém. Esta área não tinha filtragem de ar e estava aberta ao tráfego e operações de rotina do armazém. Veja aqui o gráfico .
Amostragem de Ar
Amostragem de ar microbiano e particulado foi realizada durante o estudo em cada local. Placas decantadas foram escolhidas para amostragem passiva de ar. As placas foram preparadas, estéreis, com diâmetro padrão de 100 mm e expostas por duas horas. Os meios escolhidos foram Tryptic Soy Agar (TSA) e Rose Bengal Agar (RBA) com Suplemento Antimicrobiano C. Cinco placas de TSA e cinco placas de RBA foram expostas em cada um dos dias de teste, conforme indicado nos gráficos. O TSA foi incubado a 28-32 ° C durante 48 horas. O RBA foi incubado a 20 – 22 ° C durante 96 a 120 horas.
As placas foram enumeradas para bactérias no TSA e fungos no RBA. Os dados foram compilados, calculados em média de acordo com bactérias e fungos e representados graficamente nos gráficos de barras abaixo. Os resultados médios foram arredondados porque uma fração de um organismo não é viável.
A contagem de partículas transportadas pelo ar foi realizada usando o Biotest APC Plus. Uma amostra de dez minutos foi retirada, a qual coletou 1 pé cúbico de ar (28,3 L). As partículas foram medidas a 0,5 e 5,0 micrômetros (μm).
Como esperado, os resultados da sala limpa foram baixos em partículas, menos de 100 partículas por pé cúbico e com contaminação bacteriana mínima no ar. Um organismo foi recuperado apenas em três ocasiões. Nenhum molde foi recuperado. A FlexLine estava mais contaminada. A maior contagem de bactérias recuperada foi de 8 cfu, a mais baixa <1 e em média 2 cfu. Para fungos, a contagem alta foi 10, a baixa foi <1 e, em média, 1 cfu. Partículas em média 6.000 partículas por pé cúbico. O armazém estava notavelmente contaminado. A maior contagem de bactérias recuperada foi de 8 cfu, a mais baixa <1 e em média 2 cfu. Para o molde, a contagem alta foi de 51, a baixa foi de 2 e, em média, 17 cfu. Partículas em média 256.000 partículas por pé cúbico.
Discussão e conclusão
É interessante que todos os resultados se mostraram estéreis. Microbiologistas e inspetores da FDA ficariam surpresos com esses resultados. Historicamente, tem havido suspeitas significativas de que um ambiente infestado de mofo garantiria que os esporos fossem aspirados para a garrafa. As empresas farmacêuticas e de biotecnologia que realizam manipulações assépticas costumam ter medo de contaminar o Álcool Isopropílico Estéril (IPA) com esporos, de modo que jogam fora os frascos usados a cada turno. Parece que, felizmente, isso não é mais necessário. Pode ser interessante encher os frascos de spray de gatilho com meio líquido nutritivo para ver se os organismos são realmente atraídos de volta para o frasco. Este estudo pode ser do interesse de um instituto de pesquisa e treinamento farmacêutico para finalmente responder a esta pergunta.
Em conclusão, dos 12 frascos finais testados durante os 30 dias inteiros, todos se mostraram estéreis. O uso de frascos de spray de gatilho TX3270 estéril 70% isopropanol da Texwipe em ambientes contaminados confirmados não promove ou mantém o crescimento de bactérias ou fungos dentro do frasco.
Fonte: Texwipe